久久pornI久香蕉I日本xxxx裸体xxxx17I亚洲最新av在线网址I狠狠狠狠狠狠I香蕉视频在线观看18I日韩免费小视频I欧美吞精I特级毛片网

產品展示
PRODUCT DISPLAY
技術支持您現在的位置:首頁 > 技術支持 > PCR擴增產物的檢測分析
PCR擴增產物的檢測分析
  • 發布日期:2018-05-11      瀏覽次數:6525
    • PCR擴增反應完成之后,必須通過嚴格的鑒定,才能確定是否真正得到了準確可靠的預期特定擴增產物。凝膠電泳是檢測PCR產物常用和zui簡便的方法,能判斷產物的大小,有助于產物的鑒定。凝膠電泳常用的有瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳,前者主要用于DNA  pian段大于100bp者,后者主要用來檢測小片段DNA。

      1.瓊脂糖凝膠電泳

      這是實驗室zui常用的方法,簡便易行,只需少量DNA即可進行實驗。其原理是不同大小的DNA分子通過瓊脂糖凝膠時,由于泳動速度不同而被分離,經溴化乙錠(EB)染色,在紫外光照射下DNA分子發出熒光而判定其分子的大小。 
      用于電泳檢測PCR產物的瓊脂糖濃度常為1%—2%,應該使用純度高的電泳純級瓊脂糖,這種瓊脂糖已除去了熒光抑制劑及核酸酶等雜質。

      (1)制膠

      瓊脂糖凝膠厚度約為3~5mm。過薄則加樣孔樣品會溢出來,過厚觀察時熒光穿透不強以至有些小片段DNA帶型不易分辨。如配制2%凝膠100ml,稱取瓊脂糖2g于三角瓶中,加入100ml 0.5×TBE液,微波爐加熱2-5min,使瓊脂糖*溶解(注意不要暴沸),置室溫等溫度下降至60℃時,加入終濃度0.5μg/ml的EB液,充分混勻后倒板(注意排除氣體)。

      (2)加樣和電泳

      上樣時一般取PCR反應液5~10μl,加入3μl溴酚蘭液,充分混勻,加入凝膠加樣孔中。電泳儀可用一般穩壓可調中壓電泳儀,電泳工作液為0.5×TBE液,接通電源,使樣品由負極向正極移動。60-100V恒壓電泳約30-60分鐘。

      (3)檢測

      將凝膠板放在紫外透射儀的石英玻璃臺上進行檢測,DNA產物與熒光染料EB形成橙黃色熒光復合物。觀察各泳道是否有橙黃色熒光帶出現,并與擴增時所設的陽性對照比較,判斷陽性或陰性結果。也可在電泳時以標準分子量作對照,判斷其擴增片段是否與設計的大小相一致。

      2、聚丙烯酰胺凝膠電泳

      聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖凝膠電泳繁瑣,但在引物純化、PCR擴增指紋圖、多重PCR擴增、PCR擴增產物的酶切限制性長度多態性分析時常用到。

      它與瓊脂糖凝膠電泳比較具有如下優點:

      ①分辨率很強,可達1bp;

      ②能裝載的DNA量大,達每孔10μgDNA;

      ③回收的DNA純度高;

      ④其銀染法的靈敏度較瓊脂糖中EB染色法高2~5倍;

      ⑤避免了EB迅速退色的弱點,銀染的凝膠干燥后可長期保存。

      聚丙烯酰胺凝膠電泳分辨DNA  pian段的有效范圍:

      (1)制膠

      在兩塊制膠玻璃板中間放上墊片,放上制膠架,擰緊制膠螺絲夾緊玻璃板。

      制備適量合適濃度的凝膠,使之略多于膠板。制備100μl體積凝膠的配制方法見下表。 

      不同濃度(%)聚丙酰胺凝膠的制法:

       

       

      試劑

      3.5%

      5%

      8%

      12%

      20%

      30%丙烯酰胺溶液(ml)

      11.6

      16.6

      26.6

      40

      66.6

      水(ml)

      67.7

      62.7

      26.6

      40

      66.6

      5×TBE(ml)

      20

      20

      20

      20

      20

      10%過硫酸銨(ml)

      0.7

      0.7

      0.7

      0.7

      0.7

      TEMED(ml)

      0.035

      0.035

      0.035

      0.035

      0.035

       

       

      在加入TEMED和10%過硫酸銨后,立即混勻,倒入放置45℃角的玻璃板內,*注滿(注意不要有氣泡),迅速將玻璃板放置水平位置。立即放成型梳子于腔頂并夾緊,待30-60分鐘膠聚合后,取下膠板,放入電泳槽中固定。

      (2)加樣和電泳

      上下槽中加入1×TBE電泳緩沖液,溢過加樣孔,拔出梳子,排出加樣孔中的氣泡,將PCR產物或限制性內切酶消化產物2與1上樣緩沖液混勻,用微量注射器加入加樣孔底部,使樣品在孔底成一層,兩側孔中加入標準分子量的DNA Marker。

      以2-10V/cm電壓電泳,電泳時間足夠長,使片斷足以分開,待指示劑走到適宜位置時關閉電源,將膠片取出。

      (3)銀染

      分開兩塊玻璃板,將凝膠片放入100ml銀染固定液中振蕩15min,雙蒸水洗3次,每次2min,然后將凝膠片轉入100ml 0.2%的AgNO3中于搖床上染色約10min,吸去AgNO3液,用雙蒸水洗3次,每次30s,加入100ml顯色液約7-10min,待DNA帶顯示清除時,吸去顯色液,加入固定液Na2CO3,靜置2-3min,取出凝膠觀察。

    魏經理
    • 手機

      13916499749

    主站蜘蛛池模板: 国产黄色大片网站 | 啪啪网免费 | 无码国模国产在线观看免费 | 久久综合给久久狠狠97色 | 国模欢欢炮交啪啪150 | 蜜桃臀av在线 | 国产av一区二区精品久久 | 欧美性网址 | 色香av| 四虎影视永久地址www成人 | 欧美成人91 | 国内精品伊人久久久久影院对白 | 免费男人和女人牲交视频全黄 | 日本久操视频 | 国产成人综合久久精品推荐 | 日韩成人无码v清免费 | 中文字幕一区二 | 人妻熟女αⅴ一区二区三区 | 无码高潮爽到爆的喷水视频 | 欧洲精品卡1区2卡三卡四卡 | www成人啪啪18软件 | 宅女噜噜66国产精品观看免费 | 老司机午夜精品视频 | 香港a级毛片| 日韩精品一区二区三区免费视频观看 | 日本三级全黄 | 天干夜夜爽爽日日日日 | 国产88av | 91麻豆网站 | 久久毛片一区二区三区 | 久久久妇女国产精品影视 | 欧美日本一区 | 中文精品久久久久国产网址 | 国产自偷自偷免费一区 | 久热国产精品视频 | 无码内射中文字幕岛国片 | 免费高潮视频95在线观看网站 | 日本一卡2卡3卡4卡5卡精品视频 | 91av小视频| 精品夜夜爽欧美毛片视频 | 欧洲精品久久 | 午夜福利09不卡片在线机视频 | 成人动漫在线播放 | 日韩欧美麻豆 | 午夜黄色在线观看 | 国产精品人妻一码二码尿失禁 | 久久精品女人天堂av免费观看 | 老熟女强人国产在线播放 | 性欧美疯狂xxxxbbbb | 热久久久久 | 一区精品二区国产 | 久久国内免费视频 | 老熟妇毛片 | 97精品国产97久久久久久免费 | 蕾丝av无码专区在线观看 | 777色婷婷视频二三区 | 国产一区二区在线视频观看 | 欧美自拍偷拍一区 | www成人精品免费网站青椒 | 成人精品区| 草久在线 | 黄色av网址在线 | 日本一级中文字幕久久久久久 | 日日碰狠狠添天天爽五月婷 | 三级网站免费 | 亚洲区一区二 | 在线视频国产网址你懂的 | 久久成人国产精品免费软件 | 亚洲精品午夜 | 青青草视频国产 | 四库影院永久国产精品 | 亚洲国产成人一区二区精品区 | 国内a级毛片| 免费视频欧美无人区码 | 亚洲自拍偷拍视频 | 国产精品成人久久久 | 啪啪黄色网址 | 欧美色视频在线播放 | 日韩一区精品视频一区二区 | 国产真实愉拍系列在线视频 | 国产一级淫片a免费播放口欧美 | 午夜视频在线观看免费视频 | 色婷婷国产精品综合在线观看 | 韩国午夜福利片在线观看 | 欧美一级免费 | 91沈先生在线 | 国产日韩在线观看视频 | av色蜜桃一区二区三区 | 欧美老妇与zozozo交 | 国产精品美女久久久久久2021 | 国产网址在线观看 | 麻豆国产在线精品国偷产拍 | 国产做爰xxxⅹ久久久小说 | 亚洲一区二三区 | 欧美性潮喷xxxxx免费视频看 | av不卡免费观看 | 99久99| 欧美色综合天天久久综合精品 | 初尝情欲h名器av |