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溶出性抗菌織物抗(抑)效果浸漬試驗(yàn)
  • 發(fā)布日期:2018-03-30      瀏覽次數(shù):4929
    • 1 原  理 
      將試樣和對照織物分別放于三角瓶中,用含有肉湯培養(yǎng)基的試驗(yàn)菌懸液接種于試樣和對照織物上,經(jīng)培養(yǎng)后,分別將培養(yǎng)前后試樣上的細(xì)菌洗下,測定細(xì)菌的數(shù)量,可計(jì)算出試樣上細(xì)菌減少的百分率。該方法適用于溶出性抗菌織物抗(抑)效果的檢測。

       

      2 實(shí)驗(yàn)器材 

      (1)實(shí)驗(yàn)菌株  金黃色葡萄球菌(ATCC 6538) 

      (2)試樣  在距試樣布邊 10cm 以上、離布端 1m 以上部位,剪取直徑為 5cm 的圓形試樣若干(需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類別及織物織法而定,以能吸收1ml 菌液且三角瓶中不留殘液為度)。另同法剪取對照織物若干,取 3 份試樣和 2 份對照織物分別裝于三角瓶中,蓋好瓶口,121℃ 15min滅菌備用 

      (3)肉湯培養(yǎng)基 

      (4)胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基 

      (5)磷酸鹽緩沖液(PBS,0.03mol/L,pH為7.2~7.4)

      (6)恒溫水浴箱

      (7)37℃培養(yǎng)箱

       

      3 菌懸液的制備 
      用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平皿上,在 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24h,取平皿上典型的菌落移種到含肉湯培養(yǎng)基的三角瓶中,在 37℃條件下培養(yǎng) 24h,用肉湯對培養(yǎng)液進(jìn)行系列稀釋,使菌懸液的含菌量為 1×105cfu/mL~5×105cfu/mL。

       

      4 試驗(yàn)步驟 

      (1)分別取 1mL 菌懸液加在 3 份準(zhǔn)備好的三角瓶內(nèi)的織物上,確保其均勻分布,且三角瓶中不留多余液,封好瓶口,以防蒸發(fā)。 

      (2)分別在一個(gè)盛有試樣和對照織物的三角瓶中加入 100mL 緩沖液,劇烈搖晃 1min 洗滌細(xì)菌,取 1mL 做系列1 0倍稀釋,選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿,作為“0”接觸時(shí)間樣品和對照織物上的細(xì)菌數(shù)。  

      (3)將另一個(gè)裝有接種試樣的三角瓶在 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 20h±2h,然后加入 100mL緩沖液,劇烈搖晃 1min 洗滌細(xì)菌,取 1mL 做系列10倍稀釋,選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿,作為試驗(yàn)組。   

      (4)試樣不接種菌懸液,在“0”接觸時(shí)間加入 100mL 緩沖液,劇烈搖晃 1min 取樣,接種平皿,作為陰性對照組。 

      (5)另取1個(gè)裝有對照織物的三角燒瓶,接種 1mL 菌懸液后,在 37℃ 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20h±2h,然后加入 100mL 緩沖液,劇烈搖晃 1min 洗滌細(xì)菌,取 1mL 做系列10倍稀釋,選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿,作為陽性對照組。 

      (6)將陰性和陽性對照樣本與試驗(yàn)組樣本一并放入 37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。 

      (7)試驗(yàn)重復(fù)3次。

      (8)結(jié)果計(jì)算

      B或C或(B+C)/2-A 
      抑菌率(%)=                     ×100 
      B或C或(B+C)/2  

       試驗(yàn)組試樣上的細(xì)菌數(shù); “0”接觸時(shí)間試樣上的細(xì)菌數(shù);

      “0”接觸時(shí)間對照織物上的細(xì)菌數(shù); 

      如果“B”和“C”差別較大時(shí),取較大值;如果“B”和“C”差別不大時(shí),取平均值。

       

      5 評價(jià)規(guī)定 

      “0”接觸時(shí)間對照織物的平均菌落數(shù)應(yīng)在 1×103cfu/mL~5×103cfu/mL。 陰性對照應(yīng)無菌生長,陽性對照菌數(shù)比“0”接觸時(shí)間的菌數(shù)明顯增加。 各次試驗(yàn)的抑菌率均≥50%,即判定該樣片具有抗菌作用。

       

      6 注意事項(xiàng) 
      對織物進(jìn)行染菌操作時(shí),應(yīng)確保其均勻分布,且三角瓶中不沾染或存留多余菌液。 三角瓶內(nèi)的織物染菌后,應(yīng)將瓶口封好,以防液體蒸發(fā),造成細(xì)菌死亡。

    魏經(jīng)理
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